मंकीपॉक्स व्हायरस रिअल टाइम पीसीआर किट
उत्पादन तपशील
अभिप्रेत वापर
रीअल टाइम पीसीआर सिस्टीम वापरून मानवी सीरम किंवा लेशन एक्स्युडेट नमुन्यांमध्ये मंकीपॉक्स व्हायरस शोधण्यासाठी याचा वापर केला जातो.
चाचणी तत्त्व
हे उत्पादन फ्लोरोसेंट प्रोब-आधारित Taqman® रिअल-टाइम PCR परख प्रणाली आहे.मंकीपॉक्स विषाणूचे F3L जनुक शोधण्यासाठी विशिष्ट प्राइमर्स आणि प्रोब तयार केले आहेत.खोटे-नकारात्मक परिणाम टाळण्यासाठी मानवी संरक्षित जनुकांना लक्ष्य करणारे अंतर्गत नियंत्रण नमुना संकलन, नमुना हाताळणी आणि रिअल-टाइम पीसीआर प्रक्रियेचे निरीक्षण करते.किट एक पूर्णपणे प्रिमिक्स लायओफिलाइज्ड प्रणाली आहे, ज्यामध्ये मंकीपॉक्स व्हायरस शोधण्यासाठी आवश्यक साहित्य समाविष्ट आहे: न्यूक्लिक अॅसिड अॅम्प्लिफिकेशन एन्झाइम, यूडीजी एन्झाइम, रिअॅक्शन बफर, विशिष्ट प्राइमर आणि प्रोब.
मुख्य सामग्री
प्रदान केलेले घटक टेबलमध्ये सूचीबद्ध आहेत.
| घटक | पॅकेज | घटक |
| मंकीपॉक्स व्हायरसLyophilized Premix | 8 पट्टी पीसीआर ट्यूब× 6 पाउच | प्राइमर्स, प्रोब, dNTP/dUTP मिक्स, Mg2+, Taq DNA पॉलिमरेज, UDG एन्झाइम |
| एमपीव्ही सकारात्मक नियंत्रण | 400 μL×1 ट्यूब | लक्ष्य जनुक असलेले DNA अनुक्रम |
| एमपीव्ही नकारात्मक नियंत्रण | 400 μL×1 ट्यूब | मानवी जनुक विभाग असलेले DNA अनुक्रम |
| विरघळणारे समाधान | 1 एमएल × 1 ट्यूब | स्टॅबिलायझर |
| अनुरूपतेचे प्रमाणपत्र | 1 तुकडा | / |
ऑपरेशन फ्लो
1. नमुनासंकलन:नुसार नमुना निर्जंतुकीकरण ट्यूबमध्ये गोळा केला पाहिजे
मानक तांत्रिक वैशिष्ट्यांसह.
2. अभिकर्मक तयारी (अभिकर्मक तयारी क्षेत्र)
किटचे घटक बाहेर काढा, स्टँडबाय वापरासाठी खोलीच्या तपमानावर संतुलित करा.
3. नमुना प्रक्रिया (नमुना प्रक्रिया क्षेत्र)
3.1 न्यूक्लिक अॅसिड काढणे
व्हायरल डीएनए एक्सट्रॅक्शन किटच्या संबंधित आवश्यकता आणि प्रक्रियांनुसार न्यूक्लिक अॅसिड काढण्यासाठी 200μL द्रव नमुने, सकारात्मक नियंत्रण आणि नकारात्मक नियंत्रण घेण्याची शिफारस केली जाते.
3.2 Lyophilized पावडर विरघळणारे आणि टेम्पलेट जोडणे
नमुन्यांच्या संख्येनुसार मंकीपॉक्स व्हायरस लायोफिलाइज्ड प्रिमिक्स तयार करा.एका नमुन्यासाठी Lyophilized premix पावडर असलेली PCR ट्यूब आवश्यक आहे.नकारात्मक नियंत्रण आणि सकारात्मक नियंत्रण हे दोन नमुने मानले पाहिजेत.
(1) Lyophilized premix असलेल्या प्रत्येक PCR ट्यूबमध्ये 15μL विरघळणारे द्रावण जोडा, नंतर प्रत्येक PCR ट्यूबमध्ये अनुक्रमे 5μL काढलेले नमुने/ नकारात्मक नियंत्रण/ सकारात्मक नियंत्रण जोडा.
(२) पीसीआर ट्यूब घट्ट झाकून ठेवा, लायोफिलाइज्ड पावडर पूर्णपणे विरघळत आणि मिश्रित होईपर्यंत पीसीआर ट्यूब हाताने झटकून टाका, तात्काळ लो-स्पीड सेंट्रीफ्यूगेशनद्वारे पीसीआर ट्यूबच्या तळाशी द्रव गोळा करा.
(३) शोधण्यासाठी सामान्य रिअल-टाइम पीसीआर साधन वापरत असल्यास, पीसीआर ट्यूब थेट प्रवर्धन क्षेत्रामध्ये हस्तांतरित करा;शोधण्यासाठी BTK-8 वापरत असल्यास, खालील ऑपरेशन्स करणे आवश्यक आहे: PCR ट्यूबमधून 10 μL द्रव BTK-8 च्या प्रतिक्रिया चिप विहिरीमध्ये स्थानांतरित करा.एक पीसीआर ट्यूब चिपवरील एका विहिरीशी संबंधित आहे.पाईपिंग ऑपरेशन दरम्यान, विंदुक 90 अंश उभ्या असल्याची खात्री करा.एरोसोल बॅरियर पिपेट टिप्स विहिरीच्या मध्यभागी मध्यम शक्तीने ठेवल्या पाहिजेत आणि पिपेट पहिल्या गियरवर पोहोचल्यावर (फुगे टाळण्यासाठी) ढकलणे थांबवावे.विहिरी भरल्यानंतर, सर्व विहिरींना झाकण्यासाठी एक प्रतिक्रिया चिप झिल्ली काढा आणि चिप नंतर प्रवर्धन शोध क्षेत्रात हस्तांतरित केली जाईल.
4. पीसीआर प्रवर्धन (डिटेक्शन एरिया)
4.1 PCR ट्यूब/प्रतिक्रिया चिप रिअॅक्शन टँकमध्ये ठेवा आणि प्रत्येक प्रतिक्रियेची नावे संबंधित क्रमाने व्यवस्थित सेट करा.
4.2 डिटेक्शन फ्लोरोसेन्स सेटिंग्ज: (1) मंकीपॉक्स व्हायरस (FAM);(2) अंतर्गत नियंत्रण (CY5).
4.3 खालील सायकलिंग प्रोटोकॉल चालवा
ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio चा प्रोटोकॉल:
| पायऱ्या | तापमान | वेळ | सायकल | |
| 1 | प्री-डिनेच्युरेशन | 95℃ | 2 मि | 1 |
| 2 | विकृतीकरण | 95℃ | 10 से | 45 |
| एनीलिंग, विस्तार, फ्लोरोसेन्स अधिग्रहण | 60℃ | 30 से | ||
BTK-8 चा प्रोटोकॉल:
| पायऱ्या | तापमान | वेळ | सायकल | |
| 1 | प्री-डिनेच्युरेशन | 95℃ | 2 मि | 1 |
| 2 | विकृतीकरण | 95℃ | 5 से | 45 |
| एनीलिंग, विस्तार, फ्लोरोसेन्स अधिग्रहण | 60℃ | 14 एस | ||
5. परिणामांचे विश्लेषण (कृपया इन्स्ट्रुमेंट यूजर मॅन्युअल पहा)
प्रतिक्रियेनंतर, परिणाम स्वयंचलितपणे जतन केले जातील.विश्लेषण करण्यासाठी "विश्लेषण करा" वर क्लिक करा आणि इन्स्ट्रुमेंट आपोआप परिणाम स्तंभातील प्रत्येक नमुन्याच्या Ct मूल्यांचा अर्थ लावेल.नकारात्मक आणि सकारात्मक नियंत्रण परिणाम खालील "6. गुणवत्ता नियंत्रण" च्या अनुरूप असतील.
6. गुणवत्ता नियंत्रण
6.1 नकारात्मक नियंत्रण: FAM चॅनेलमध्ये Ct किंवा Ct>40 नाही, CY5 चॅनेलमध्ये Ct≤40 सामान्य प्रवर्धन वक्रसह.
6.2 सकारात्मक नियंत्रण: सामान्य प्रवर्धन वक्र असलेल्या FAM चॅनेलमध्ये Ct≤35, CY5 चॅनेलमध्ये सामान्य प्रवर्धन वक्रसह Ct≤40.
6.3 वरील सर्व निकषांची पूर्तता केल्यास निकाल वैध आहे.अन्यथा, निकाल अवैध आहे.
परिणाम व्याख्या
खालील परिणाम शक्य आहेत:
| FAM चॅनेलचे Ct मूल्य | CY5 चॅनेलचे Ct मूल्य | व्याख्या | |
| 1# | Ct किंवा Ct>40 नाही | ≤40 | मंकीपॉक्स व्हायरस नकारात्मक |
| 2# | ≤40 | कोणतेही परिणाम | मंकीपॉक्स व्हायरस पॉझिटिव्ह |
| 3# | ४०-४५ | ≤40 | पुन्हा चाचणी;ते अजूनही 40~45 असल्यास, 1# म्हणून अहवाल द्या |
| 4# | Ct किंवा Ct>40 नाही | Ct किंवा Ct>40 नाही | अवैध |
टीप: अवैध परिणाम आढळल्यास, नमुना गोळा करणे आणि पुन्हा चाचणी करणे आवश्यक आहे.
ऑर्डर माहिती
| उत्पादनाचे नांव | मांजर.नाही | आकार | नमुना | शेल्फ लाइफ | ट्रान्स.& Sto.टेंप. |
| मंकीपॉक्स व्हायरस रिअल टाइम पीसीआर किट | B001P-01 | 48 चाचण्या/किट | सीरम/लेशन एक्स्युडेट | 12 महिने | -25～-15℃ |
